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    大鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)的操作步驟及注意事項

    發(fā)布時間: 2016/2/26  點擊次數(shù): 755次
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    操作步驟

    1.         標準品的稀釋:大鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

    4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

    5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

    7.         溫育:操作同3。

    8.         洗滌:操作同5。

    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。

    11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

    注意事項

    1.大鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

    4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

    5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

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